Article
Untersuchungen zur Differenzierung gesunder und degenerativ vorgeschädigter Bandscheibenzellen in unterschiedlichen Kulturen
Search Medline for
Authors
Published: | October 19, 2004 |
---|
Outline
Text
Fragestellung
Kultivierung und Vermehrung von gesunden und degenerativ geschädigten humanen Bandscheibenzellen (BSZ) in 2D- und 3D-Kultur Modellen. Die unterschiedliche Exprimierung der Gene von Kollagen Typ 1, 2, und 10, Interleukin b und Aggrekan wurde bestimmt. Unterschiede in der Genexpression in Nucleus pulposus und Annulus fibrosus wurden analysiert.
Methoden
BSZ von Patienten mit idiopathischer Adoleszentenskoliose (n=10) wurden im Rahmen der VDS (Halm-Zielke) asserviert. Bei einer zweiten Patientengruppe wurden bei degenerativen LWS-Erkrankungen BSZ bei ALIF- oder TLIF-Operationen gewonnen (n=10). Nach Primärkultur auf Monolayer wurden die BSZ passagiert und weiter auf Monolayer kultiviert oder in Alginat eingebettet. Bei jede Kulturstadium wurde ein Zellaliquot für die mRNA Extraktion benutzt. Die Vitalität der Zellen und ihre Vermehrungsrate wurden ermittelt sowie mittels Light Cycler die RNA-Synthese für die angegebenen Differenzierungs- und Entzündungsmarker bestimmt.
Ergebnisse
Auf Monolayer ist eine Abnahme der Kollagen Typ 2 und Aggrekan Synthese in Abhängigkeit der Verdopplungsrate der Zellen zu beobachten. Wenn dedifferenzierte Zellen zwei Wochen in Alginat kultiviert werden, dann wird die Synthese von Kollagen Typ 2 und Aggrekan zum Teil wieder hochreguliert.
Schlussfolgerungen
In vitro Kultur von BSZ aus Annulus und Nucleus ist möglich. Je mehr Zellen sich in Kultur verdoppeln, desto größer wird die Dedifferenzierung. Dedifferenzierte Zellen können in Alginat ihren Phänotyp wieder reexprimieren. Die Marker können im Rahmen des biologischen Bandscheiben-Ersatzes an Bedeutung gewinnen.