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Das Cystein-reiche Protein 61 (hCYR61, CCN1) beeinflusst die Proliferation humaner Osteoblasten und Komponenten Differenzierungs-relevanter Signaltransduktionswege
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Published: | October 19, 2004 |
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Fragestellung
Das humane Cystein reiche Protein 61 (hCYR61, CCN1) wirkt in wichtigen zellulären Prozessen und Vorarbeiten dokumentierten die Assoziation der hCYR61 Expression im humanen Knochen mit Konditionen erhöhter Neubildung. Zielsetzung der Arbeiten ist die Aufklärung des molekularen Wirkmechanismus in Knochenzellen.
Methoden
Das Protein wurde im Baculovirus-System exprimiert. Zur Messung der Proliferation erfolgte ein luminometrischer ATP-Assay. Postkonfluente Osteoblasten (hFOB Zellen) wurden mit rhCYR61 behandelt, totale RNA wurde transkribiert, mit Cy3 bzw. Cy5 markiert, an Arrays mit 1920 PCR Produkten knochenrelevanter Gene hybridisiert (einschl. "colour flip") und mit der GenePix Software ausgewertet. Die Reevaluierung der Daten erfolgte mittels RT-PCR.
Ergebnisse
Humane Osteoblasten antworteten auf die rhCYR61 Gabe mit einer 30-50%igen Steigerung der Proliferation. Die Array-Analyse lieferte 28 regulierte Genprodukte von denen 2/3 in der Reevaluierung positiv waren. Regulierte Genprodukte umfassten Membran Rezeptoren (z. B. notch) sowie intrazelluläre Signal Moleküle und Transkriptionsfaktoren. Die Identifizierung mehrerer Faktoren eines Signalweges als Membrankomponente bzw. als downstream Mediator wie im Falle des notch und des hedgehog-Signalweges unterstützte die Validität der Daten.
Schlussfolgerungen
Humane Osteoblasten sind Zielzellen der hCYR61-Wirkung. Die gesteigerte Proliferation und die Regulation von Differenzierungs-relevanten Genprodukten sind Funktionen des hCYR61 Proteins im Mikroenvironment des Knochens. hCYR61 repräsentiert einen Kontrollfaktor zellulärer Funktion und Geweberegeneration.