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Ein häufiger Haplotyp in dem Gen CFH, welches für die Regulation des Alternativen Wegs der Gerinnung zuständig ist, konnte in Zusammenhang gebracht werden mit der individuellen Prädisposition für die altersabhängige Makuladegeneration. CFH wird hauptsächlich in der Leber synthetisiert. In PCR-Analysen wurden CFH- und FHL-1-Transcripte in humanen RPE Zellen nachgewiesen. In dieser Studie analysierten wir die immunhistochemische Expression von CFH und FHL-1 in der ARPE-19 Zelllinie.

Die ARPE-19 Zelllinie erhielten wir vom ATCC Depository und kultivierten sie in Dulbeccos modifizierten Eagles Medium und Ham's 12 Medium, welches 20% fötales Kälberserum (FCS) enthielt. Alle Experimente wurden zwischen der 10ten und 18ten Passage durchgeführt. Nachdem wir die Serumrückstände entfernt hatten, inkubierten wir die Zellen in serumfreiem Medium , welches ansteigende Konzentration von Interleukin-6 enthielt, für 24 Stunden. Die Überstände wurden für die Wester-Blot-Analyse verwendet. Für den immunhistochemischen Nachweis von CFH wurde die Zellen mit Aceton fixiert. Anschließend wurden sie mit goat-Antikörper gegen humanen CFH und rabbit-Antikörper gegen humanen FHL-1 für 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Mit dem zweiten Antikörper, konjugiert zu Alexa 555, wurden die Zellen für eine Stunde inkubiert, gefolgt von einer Kernfärbung mit DAPI 5 µl/ml in PBS für 15 min. Die Mediumüberstände wurden angereichert in Americon Ultra chamber (Millipore) 10.000Da. Der Western-Blot wurde durchgeführt in 10% SDS-Gel unter nicht-reduzierenden Bedingungen.

Die Immunhistochemie der ARPE-19 Zellen war positiv für CFH und FHL-1. Interleukin-6 induzierte die CFH- und FHL-1-Expression dosisabhängig, obwohl eine basale CFH- und FHL-1-Produktion auch ohne Interleukin-6-Stimulation nachgewiesen werden konnte. Mittels Western-Blot konnte in den Überständen CFH und FHL-1 nachgewiesen werden. Die Kontrollen mit humanem Albumin und Medium waren negativ.

ARPE-19 Zellen produzieren CFh und FHL-1. Da der CFH-Polymorphismus in direktem Zusammenhang mit der altersabhängigen Makuladegeneration steht, könnte eine niedrige Komplementaktivität in dem RPE-Choroidea-Übergang in die Pathogenese mit involviert sein. Die lokale Produktion des RPE von CFH und anderen Komplementfaktoren könnte ebenso von pathologischem Wert sein.