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104th DOG Annual Meeting

21. - 24.09.2006, Berlin

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Adulte Netzhaut in Perfusionsorgankultur: Immunohistochemische Charakterisierung eines organotypischen in-vitro-Modells

Maintenance of adult porcine retina in perfusion culture: immuno-histochemical characterisation of an organotypic in vitro model

Meeting Abstract

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  • J. Hillenkamp - Augenklinik der Universität Regensburg
  • K. Kobuch - Augenklinik der Universität Regensburg
  • W. A. Herrmann - Augenklinik der Universität Regensburg
  • V. P. Gabel - Augenklinik der Universität Regensburg
  • H. G. Sachs - Augenklinik der Universität Regensburg

Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft e.V.. 104. Jahrestagung der Deutschen Ophthalmologischen Gesellschaft (DOG). Berlin, 21.-24.09.2006. Düsseldorf, Köln: German Medical Science; 2006. Doc06dogSO.04.10

The electronic version of this article is the complete one and can be found online at: http://www.egms.de/en/meetings/dog2006/06dog431.shtml

Published: September 18, 2006

© 2006 Hillenkamp et al.
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Ziel

Die Charakterisierung eines organotypischen adulten retinalen in-vitro-Perfusionsorgankulturmodells.

Methode

Frische Retina-Pigmentepithel (RPE)-Aderhaut Präparate wurden aus Schweineaugen entnommen und in Zwei-Kompartment-Kammern eingespannt. Die retinale und die choroidale Seite der Präparate wurden kontinuierlich mit Kulturmedium perfundiert. pO2, pCO2, [K+], [Glukose] und [Laktat] im Medium wurden gemessen. Die Morphologie der Netzhaut und des RPE wurden nach 24 Stunden, 4, 7 und 10 Tagen in Kultur mit Licht- und Elektronenmikroskopie (LM und EM) untersucht. Die retinale Zytoarchitektur wurde ausserdem immunhistiochemisch genauer untersucht (NF 200, GFAP, Synaptophysin, Syntaxin, Rhodopsin und TUNEL-Test). Frische Retina-RPE-Aderhaut Präparate und Präparate in statischer Organkultur dienten als Kontrollen.

Ergebnisse

LM und EM zeigten bei allen Proben nach 24 Stunden in Perfusionsorgankultur intakte retinale- und RPE-Zytoarchitektur ohne wesentliche Zeichen von Apoptose. Nach 4 Tagen in Perfusionsorgankultur waren die retinale und RPE-Zytoarchitektur intakt, die Photorezeptor-Aussensegmente jedoch bei den meisten Präparaten desintegriert und es fanden sich einige nekrotische Zellen. Die immunhistochemischen Untersuchungen bestätigten eine intakte retinale Zytoarchitektur. Nach 4 Tagen in Perfusionsorgankultur traten erste Zeichen von Apoptose auf. Die Kontrollen in statischer Kultur zeigten eine disintegrierte retinale Zytoarchitektur nach 4 Tagen in Kultur.

Schlussfolgerungen

Adulte Retina-RPE-Aderhaut Präparate aus Schweineaugen können in Perfusionsorgankultur für bis zu mehreren Tagen morphologisch erhalten werden. Der Erhalt der retinalen Zytoarchitektur ist besser als in statischer Organkultur. Perfusionsorgankultur könnte helfen, die Anzahl notwendiger Tierexperimente zu verringern und bietet neue Möglichkeiten bei der Untersuchung von Substanzen, die für intraokulare Anwendung entwickelt werden.