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TNF-α, CCL-2 und CCL-20 spielen eine wichtige Rolle in einem Maus Modell zur endokrinen Orbitopathie
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Published: | February 6, 2019 |
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Einleitung: Bei der endokrinen Orbitopathie (EO) handelt es sich um eine entzündliche Erkrankung der Weichteilgewebe in der Augenhöhle, welche Ödembildung, Fettvermehrung, Augenmuskelfibrose und Verdickung in variablem Ausmaß umfasst. Zur Erforschung neuer zielgerichteter Therapien haben wir ein murines Tiermodell entwickelt (erstmals 2013 beschrieben). Ziel dieser Arbeit war es, im retroorbitalen Gewebe spezifische Zytokine als Grundlage der Entzündungsreaktion des Auges bei EO zu evaluieren.
Methoden: Für die Immunisierung wurde ein Plasmid, das die α-Untereinheit des humanen TSH Rezeptors kodiert, hergestellt. BALB/c Mäusen wurden unter Narkose 4-mal in Abständen von 3 Wochen je 50 µl Plasmid (1mg/ml) in beide Musculi biceps femorii mit anschließender Elektroevaporation zur Transfektion injiziert. Als Kontrolle wurde eine analoge Anzahl von BALB/c Mäusen mit dem Kontroll-Plasmid ß-Gal injiziert. 6 Wochen nach der letzten Immunisierung wurden die Tiere getötet und die Orbitae mikrochirurgisch entfernt. Eine Orbita wurde zur immunhistochemischen Aufarbeitung in Formalin fixiert, bei der zweiten Orbita wurde das retroorbitale Gewebe für die Zellkultur verwendet.
Ergebnisse: In der immunhistochemischen Aufarbeitung der Gewebe-Proben zeigte sich eine signifikant erhöhte Anzahl von CD3 positiven T-Zellen, F4/80 positiven Makrophagen sowie TNF- positiven Zellen im Vergleich zu den Kontrollmäusen. Dies belegt eine Entzündungsreaktion im retroorbitalem Gewebe bei den EO Mäusen. Die ex vivo kultivierten Orbitafibroblasten wurden mit TNF- stimuliert und wiesen bei den TSHR immunisierten Mäusen im Zytokinprofil einer Multi-Plex Messung statistisch signifikant vermehrt CCL-2 und CCL-20 im Vergleich zu den Kontrollmäusen auf. Dies konnte im Rahmen einer ELISA Untersuchung bestätigt werden.
Diskussion: Die vorliegenden Ergebnisse zeigen, dass TNF-α, CCL-2 und CCL-20 eine wichtige Rolle bei der Entwicklung der endokrinen Orbitopathie spielen könnten. Weitere Untersuchungen zur Spezifizierung werden aktuell durchgeführt.