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Einleitung: Die Zulassung der Immun-Checkpoint-Inhibitoren zur Therapie des Nierenzellkarzinoms haben die T-Zellen und deren Interaktionen erneut in den Fokus experimenteller Forschung zum Nierenzellkarzinom gerückt. Tumor-infiltrierende Lymphozyten (TIL) spielen bei der Pathogene des Nierenzellkarzinoms eine wichtige Rolle. Um diese TIL besser untersuchen zu können, ist es notwendig eine effiziente und sichere Methode zur Isolation der TIL aus Tumorproben zur Verfügung zu haben. Die Methode sollte die Oberflächenmarker der T Zellen nicht beeinflussen. Grade bei kleinen Tumorproben ist die Gewinnung einer ausreichenden Zahl vitaler Zellen wichtig. Wir entwickelten eine neue Methode zur enzymfreien, rein mechanischen Isolation von TIL aus frischen Tumorproben.

Methode: Tumorproben sowie korrespondieren Blutproben von 12 Patienten mit Nierentumoren wurden verwendet. Die Proben wurden in gleichgroße Stücke unterteilt, um unterschiedliche Methoden vergleichen zu können. Das Goldstandardprotokoll beinhaltet einen enzymatischen Aufschluss (Kollagenase) der Gewebeproben, im Vergleich dazu etablierten wir ein rein mechanisches Protokoll. Es erfolgten Vitalitätstests der Zell, funktionelle Test der T Zellen (Induktion der Zytokinproduktion nach polyklonaler Stimulation) und Immunhistochemischen Färbungen der Proben. Die isolierten T Zellen wurden auch hochauflösend durchflusszytometrisch analysiert. Zudem wurden die TIL auch mit den T Zellen aus den Blutproben der Patienten verglichen.

Ergebnisse: Die neue Methode erlaubte eine schnelle und sichere Isolation von TIL aus frischen Tumorproben. Es gelang die Identifikation von CD4 und CD8 pos. TIL inklusive der Treg und weiterer Subpopulationen (Anergie-Markern, z.B. PD-1). Verglichen zum Standardprotokoll erlaubte die rein mechanische Methode eine vergleichbare Zellausbeute und die Oberflächenmarker waren alle intakt. Auch die Funktionalität der TIL blieb, wie die Funktionalität der T Zellen im peripheren Blut, vollständig erhalten. Es konnten nach polyklonaler Stimulation unterschiedliche Zytokinprofile (IFN-gamma oder TNF-alpha) gemessen werden.

Schlussfolgerung: Die neue, rein mechanische Methode zur Isolation der TIL erwies sich als robuste und effektive Alternative zu enzymatischen Aufschlussmethoden. Wir konnten bei hoher Zellausbeute phenotypisch und funktionell intakte TIL aus frischen Tumorproben isolieren.