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Ein transgenes Mausmodel für Varianten der Procaspase-1
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Published: | September 12, 2014 |
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Einleitung: Bei Patienten mit rekurrierenden Fieberepisoden wurden genetische Varianten des CASP1 Gens detektiert, die zu einer reduzierten enzymatischen Aktivität der Caspase-1 und somit zu einer reduzuierten IL-1β Freisetzung führten. Um dies aufzuklären, wurde eine bacterial artificial chromosome (BAC) transgene Mauslinie etabliert, die das inaktive Casp1C284A unter der Kontrolle des endogenen Promotors exprimiert.
Methoden: Das BAC Fragment, das die markierte Casp1C284A (Casp1C284AFlag) beinhaltete, wurde in Pronuclei von C57Bl6 Maus Oocyten injiziert. Bei den Nachkommen wurde Casp1C284AFlag nachgewiesen. Sie wurden mit Casp1 knock-out (KO) Mäusen verkreuzt und der immunologische Phänotyp wurde durch in vitro Stimulationen von BMDCs charakterisiert. Die Expression des Casp1C284AFlag Transgens wurde mit qRT-PCR und Western blots quantifiziert. Zytokinlevel wurden mit cytometric bead arrays (CBA) bestimmt.
Ergebnisse: Bei einem Tier konnte das komplette Casp1C284AFlag Transgen (TG) nachgewiesen werden. Die Kreuzung mit Casp1 KO Mäusen ergab die Genotypen Casp1WT/WT/TG, Casp1WT/KO/TG und Casp1KO/KO/TG. qRT-PCR zeigte, dass in unstimulierten Zellen die Transkription der Casp1C284AFlag nur 0.1% der Wildtyp (WT) Casp1 betrug. Durch LPS konnte die Expression gesteigert werden. Nach LPS/ATP Stimulation setzten die transgenen Casp1WT/KO/TG BMDCs mehr IL-6 und TNFα frei.
Schlussfolgerung: Diese Daten weisen darauf hin, dass Casp1C284AFlag eine erhöhte Freisetzung proinflammatorischer Zytokine induziert. Dies könnte zum proinflammatorischen Phänotyp der Patienten beitragen.
Diese Studie wurde vom BMBF „Deutsches Netzwerk für Primäre Immundefekte“ (PID-NET) und vom EU Marie Curie International Reintegration grant no. GA-2007-224894 (F.P.) unterstüzt.