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In vivo Suppression von miR-199a-3p im Fischer-344 auf Lewis Rattenmodell der Nierentransplantation unterdrückt chronische Antikörper-vermittelte Abstoßung
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Autoren
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Philip Zeuschner
- Universitätsklinikum des Saarlandes
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Georg Dieplinger
- University Hospital of Cologne
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Clemens Luitpold Bockmeyer
- Friedrich-Alexander University Erlangen-Nürnberg
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Marc Eßer
- University Hospital of Cologne
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Katharina Stolle
- University Hospital of Cologne
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Winfried Padberg
- Justus-Liebig-University Gießen
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Ralph Scherer
- Hannover Medical School (MHH)
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Mahmoud Abbas
- PATHOCOM Rheine
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Peter Boor
- Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen
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Sonja Djudjaj
- Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen
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Stephan Immenschhuh
- Hannover Medical School (MHH)
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Veronika Grau
- Justus-Liebig-University Gießen
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Jan Ulrich Becker
- University Hospital of Cologne
| Veröffentlicht: | 5. Juni 2018 |
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Gliederung
Text
Antikörper-vermittelte Abstoßungsreaktionen (ABMR) sind die Hauptursache für chronischen Nierentransplantatverlust beim Menschen. Das Fischer-344 (F344) auf Lewis Rattenmodell der Nierentransplantation ohne Immunsuppression repliziert die glomerulären Veränderungen gewöhnlicher akuter ABMR beim Menschen und eine Sonderform chronischer ABMR mit Allo-immunkomplex-Ablagerungen.
miRNAs können auf posttranskriptioneller Ebene auf Signalwege Einfluss nehmen und damit ihre Zielgen-Expression herunterregulieren, ihre Rolle in der Mikrozirkulation bei ABMR ist jedoch noch nicht verstanden. Hier werden einerseits die glomerulokapillären Veränderungen der miRNA-Expression, die mit ABMR-Aktivität im F344 auf Lewis Rattenmodell assoziiert sind, untersucht. Andererseits wird der Einfluss der intravenösen Antagonisierung in vivo einer bei ABMR in den Glomeruli hochregulierten miRNA auf den Endpunkt Glomerulosklerose gezeigt.
In einem explorativen Ansatz wurde mittels TaqMan Arrays nach differentiell regulierten glomerulokapillären miRNAs im F344 auf Lewis Rattenmodell ohne Immunsuppression gesucht. 100 Glomeruli pro Tier wurden mittels Mikrodissektionstechnik aus einer Kohorte von 44 Ratten (Kontrollen, 9 Tage, 6 Wochen und 26 Wochen Iso- und Allografts) gesammelt. miRNAs, die zwischen den Kohorten signifikant unterschiedlich exprimiert waren und zusätzlich mit histopathologischen Parametern der ABMR-Aktivität korrelierten, wurden in single qRT-PCRs validiert. Targets von diesen miRNAs wurden in silico untersucht.
In einem zweiten Experiment wurde eine ausgewählte antago-miR (antago-miR-199a-3p) 8 Wochen nach Transplantation in 16 Tiere des F344 auf Lewis Rattenmodells injiziert. Die Tiere wurden 23 Wochen nach Transplantation geopfert und histologisch charakterisiert.
11 miRNAs waren zwischen den Kohorten differentiell exprimiert, sechs davon wurden in single qRT-PCRs validiert. Glomeruläre rno-miR-125b-2-3p war signifikant in frühen Allografts 9 Tage nach Transplantation hochreguliert. Rno-miR-199a-3p war signifikant in 26 Wochen Allografts im Vergleich zu Nativkontrollen erhöht. Im Gegensatz dazu war rno-miR-451a in Isografts 9 Tage und 6 Wochen nach Transplantation hochreguliert. Experimentell validierte und vorhergesagte Gentargets dieser 3 miRNAs deuten auf potentiell schädigende Effekte der ersten beiden und protektive Effekte der dritten miRNA hin.
Die Injektion der antago-miR-199a-3p in vivo führte zu einem signifikant reduzierten Glomerulosklerose-Index im Vergleich zu Tieren, die mit scrambled antago-miR behandelt wurden.
Unser Modell zeigt eine glomerulokapilläre miRNA-Signatur von ABMR-Aktivität: einerseits sind die womöglich schädigende rno-miR-125b-2-3p und rno-miR-199a-3p in Allografts hochreguliert. Andererseits führt der Ausfall der wohl protektiven rno-miR-451-5p zu Schäden in Allografts. Die bisher positiven Ergebnisse der anti-rno-miR-199a-3p Therapie in vivo werden wir in vergrößerten Kohorten noch weiter validieren.
