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Einleitung: Die Liquid Biopsy, d.h. die Blutentnahme mit dem Ziel, Aussagen über die Krebserkrankung eines Patienten zu treffen, hat in den letzten Jahren große Fortschritte erzielt. So ist das EpCAM-basierte Cellsearch^®-System als Detektionssystem für zirkulierende Tumorzellen (CTCs) u.a. beim Prostatakarzinom zugelassen. Weitere Systeme befinden sich in der Erprobung. Die Anzahl an CTCs kann für eine Prognoseeinschätzung sowie das Monitoring des Therapie-Ansprechens genutzt werden. Für das Urothelkarzinom ist bislang keine Nachweismethode zugelassen. Es ist jedoch bekannt, dass eine hohe Anzahl an CTCs mit einer schlechten Prognose einhergeht. Aus diesen Gründen haben wir verschiedene Verfahren zur CTC-Analyse verglichen.

Methoden: Es wurden zwei größenbasierte CTC-Anreicherungssysteme verwendet: VyCAP^®, ein Filtersystem mit definierter Porengröße, und Parsortix^®, ein mikrofluidisches System. Blutproben von gesunden Spendern wurden mit einer definierten Anzahl an Urothelkarzinom-Zellen versetzt. Anschließend erfolgte die Prozessierung der Proben mit den Systemen sowie eine Färbung mit DAPI (DNA) und Antikörpern gegen Zytokeratin (Tumorzellen)und CD45 (Leukozyten). Die Auszählung erfolgte fluoreszenzmikroskopisch. Parallel wurden Experimente mit abfallenden Zellzahlen mittels einer EpCAM-basierten Methode durchgeführt, um potentielle, neue Urothelkarzinom-Biomarker zu identifizieren (KRT17, KRT19, BIRC5).

Ergebnisse: VyCAP^® zeigte eine Anreicherungsrate von 61,2%, während mit Parsortix^® 72,2% der Tumorzellen wiedergefunden werden konnten. Nach EpCAM-basierter Anreicherung und der Analyse von KRT19 konnten bis zu 2 Tumorzellen nachgewiesen werden. Die Expression von BIRC5 konnte bei jeweils 2 (RT112) bzw. 200 (RT4) Tumorzellen detektiert werden.

Schlussfolgerung: Obwohl die EpCAM-basierte Methode einen validen Nachweis von CTCs ermöglicht, besteht das Risiko, CTCs, die eine geringe EpCAM-Expression zeigen, nicht zu detektieren. Daher sind EpCAM-unabhängige Verfahren von hohem klinischem Interesse. Parsortix^® ist zwar in der Prozessierung zeitaufwändig, erreicht jedoch eine deutlich höhere Nachweisrate als VyCAP^®. Insgesamt ist das Parsortix^®-System anwenderfreundlich, standardisiert und deutlich unabhängiger von äußeren Einflussfaktoren. Zukünftige Analysen von Patientenproben mit verschiedenen Systemen sowie die Identifizierung neuer Biomarker werden wichtige Einblicke in mögliche klinische Anwendungen der Liquid Biopsy für Urothelkarzinom-Patienten liefern.