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Charakterisierung der Expansionsfähigkeit neuronaler Stammzellen des Nucleus Cochlearis
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Veröffentlicht: | 19. April 2011 |
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Einleitung: In den vergangenen Jahren ist es gelungen, neuronale Stammzellen aus dem Nucleus cochlearis (N.C.) zu isolieren. Die Expansion dieser Zellen ist ein fundamentales Kriterium der Neurogenese. Daher war die Untersuchung der Zellzyklusaktivität dieser neuronalen Stammzellen Ziel unserer Untersuchungen.
Methoden: Der N.C. aus früh-postnatalen bis adulten Ratten wurde mikrochirurgisch reseziert und als Neurosphären-Assay kultiviert. Zusätzlich wurden Organkulturen für whole-mount Präparate angelegt. Zur Analyse der Zyklusaktivität wurde die Aktivität des S-Phasen-Markers Bromodesoxyuridin (BrdU) und ein Neurosphären-Kollagengel-Assay mit Immunfluoreszenzmarkierung und Zeitrafferaufnahmen ausgewertet. So konnte die Expansion von de-novo entstandenen Zellen beurteilt werden.
Ergebnisse: Aus den Untersuchungen ergab sich der Nachweis zellulärer Expansion von Stammzellen des N.C. bei früh-postnatalen und adulten Tiere sowohl in der Neurosphären-Zellkultur, als auch in der Organkultur. Es stellte sich eine Abhängigkeit sowohl von den Kulturbedingungen, als auch vom Alter der Tiere dar.
Schlussfolgerungen: Die Kombination von Immunfluoreszenzmethoden und Echtzeit-Beobachtung neuronaler Stammzellen des Nucleus cochlearis unter Kulturbedingungen ermöglicht dynamische Einblicke in die Komplexität der Neurogenese und Zelldifferenzierung. Dieses Kulturmodell ermöglicht die Untersuchung einzelner Einflüsse auf expandierende Zellen und deren Neurogenese in komplexen Geweben.