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Der Knockdown der Mediatorkomplex Untereinheit MED30 unterdrückt die Proliferation und Migration von Nierenzellkarzinomzellen
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I. Syring
- Klinik und Poliklinik für Urologie und Kinderurologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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R. Weiten
- Klinik und Poliklinik für Urologie und Kinderurologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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N. Klümper
- Pathologie des Universitätsklinikums Schleswig Holstein, Campus Lübeck und des Leibniz Forschungszentrums Borstel, Lübeck, Germany
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D. Schmidt
- Klinik und Poliklinik für Urologie und Kinderurologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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T. Müller
- Instiut für Pathologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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S. Steiner
- Instiut für Pathologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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G. Kristiansen
- Instiut für Pathologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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S.C. Müller
- Klinik und Poliklinik für Urologie und Kinderurologie, Universitätsklinikum Bonn, Bonn, Germany
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J. Ellinger
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Z. Shaikhibrahim
- Pathologie des Universitätsklinikums Schleswig Holstein, Campus Lübeck und des Leibniz Forschungszentrums Borstel, Lübeck, Germany
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S. Perner
- Pathologie des Universitätsklinikums Schleswig Holstein, Campus Lübeck und des Leibniz Forschungszentrums Borstel, Lübeck, Germany
| Published: | April 19, 2017 |
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Einleitung: Der Mediatorkomplex besteht insgesamt aus 33 Untereinheiten und spielt in der Transkription eine zentrale Rolle. Einzelne Studien konnten bereits die wichtige Beteiligung einzelner Untereinheiten, besonders in der Karzinogenese beschreiben. Bezüglich der Untereinheit MED30 konnte dies bisher nur im Magen- und Mammakarzinom bestätigt werden. Die Rolle von MED30 in urologischen Tumoren ist bisher gänzlich unbekannt.
Material & Methoden: Zunächst erfolgte die Datenbank-Analyse mittels cBioPortal zur mRNA-Expressions- und Überlebens-Analyse von MED30 im klarzelligen RCC (ccRCC) und papillären RCC (pRCC). In der funktionellen Untersuchung mittels qPCR und Westernblot zur mRNA- und Protein-Expression von MED30 wurden die NCC-Zelllinien ACHN und A498 verwendet. Nach dem Knockdown von MED15 mittels siRNA erfolgte die Untersuchung der Proliferation (EZ4U), Migration (boyden chamber migration assay) und Invasion (matrigel invasion assay). Die immunhistochemische Untersuchung (IHC) gegen MED30 erfolgte auf Tissue Microarrays (TMA) mit insgesamt 24 benignen, 141 ccRCC, 31 papillären RCC, 10 chromophoben RCC, 16 sarkomatoiden RCC, 10 Onkozytomen, und 20 Metastasen von ccRCC. Die Intensitäts-Auswertung erfolgte mittels des IRS (Immunoreactive Score) und wurde mit den klinisch-pathologischen Daten assoziiert.
Ergebnisse: In der Datenbank-Analyse mittels cBioPortal zeigte sich, dass eine mRNA-Überexpression von MED30 im ccRCC tendenziell mit einem schlechteren Überleben (Gesamtüberleben p=0.149, 84 vs. 93 Monate, progressionsfreies Überleben p=0.291, 91 vs. 124 Monate) einhergeht. Im pRCC zeigte sich bei bestehender Überexpression von MED30 ein signifikant schlechteres progressionsfreies Überleben (p=7.11e-8, 17 vs. 106 Monate). Der Knockdown von MED30 führte zu einer signifikanten Abnahme der Proliferation (ACHN um 70%, A498 um 26%), Migration (ACHN um 63%, A498 um 57%) und Invasion (ACHN um 57%, A498 um 59%). In der IHC zeigten pRCC die höchste MED30 Expression, was mit einem tendenziell schlechteren Überleben (Gesamtüberleben p=0.35 und progressionsfreies Überleben p=0.37) einherging und die Transkriptom-Daten von cBioPortal bestätigt. Zusätzlich zeigten fortgeschrittene Tumorstadien (T4) die höchste MED30 Expression in der IHC.
Zusammenfassung: Zusammenfassend scheint MED30 eine entscheidende Rolle in der Progression des RCC zu spielen.
