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Einleitung: Die Analyse der RNA-Expression mit Hilfe der real-time PCR (qRT-PCR) verwendet klassischerweise Housekeeping-Gene (HKG) als internen Vergleichsstandard. Dieses Verfahren wird zunehmend kritisch betrachtet, da es Hinweise gibt, dass die Expression gewisser HKG unter bestimmten experimentellen Bedingungen stark variieren kann. Um die Stabilität der HKG-Expression genauer zu evaluieren, untersuchten wir mittels qRT-PCR die Expressionsraten von 6 HKG während der Differenzierung von humanen Myoblastenzellkulturen.

Methoden: Folgende HKG wurden untersucht: beta-actin (ACTAB), beta-2-microglobolin (B2M), Glycerinaldehydphosphatdehydrogenase (GAPDH), Peptidylprolylisomerase A (PPIA), TATA box binding protein (TBP) und ribosomal protein, large, P0 (RPLP0). Die geNorm und NormFinder Software wurden verwendet, um die besten HKG zu identifizieren.Desweiteren wurden die Ergebnisse mittels Korrelationskoeffizient mit einem nicht RNA-Differenzierungsmarker (Kreatinkinase) verglichen.

Ergebnisse: Erstaunlicherweise zeigten die von den Computerprogrammen ausgewählten Referenzgene RPLPO und TBP mit der stabilsten Expression eine signifikante Korrelation mit der Kreatinkinase-Aktivität. ACTAB zeigte laut Software eine schlechte Stabilität, jedoch im Versuch nur eine geringe Korrelation mit der Kreatinkinase-Aktivität.

Bei weiteren Untersuchungen an differenzierenden und nicht-differenzierenden Myblastenkulturen mit 4 verschiedenen Differenzierungsmarkergenen zeigte sich, dass die Normalisierung mit ACTAB die Unterschieden zwischen den verschiedenen Zellkulturen hervorhob, die Normalisierung mit RPLPO und TBL jedoch nicht.

Schlussfolgerung: Daraus ergibt sich als bestes Referenzgen für Differenzierungsuntersuchungen an Myoblasten das Gen ACTAB.