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Laser-Dissektionsmikroskopie als Tool in der regenerativen Innenohrforschung
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Published: | April 22, 2008 |
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Einleitung: In der Innenohrforschung auf molekularer Ebene ist oft eine Bestimmung des Genexpressionslevels in Zielzellen wichtig. Der delikate Aufbau und die geringe Größe machen hier eine Trennung typischer Zielregionen wie etwa das Corti-Organ zu einer Herausforderung.
Methoden: Cochleae der Maus wurden mit gfp-exprimierenden Adenovektoren behandelt. Als Zugangsweg wurde die Lasercanalostomie des Bogengagssystems gewählt. Sie wurden in 4% PFA fixiert und in Paraffin eingebettet. Aus 8 µm Schnitten wurden mittels eines Laser-Dissectionsmikroskopes mit der Laserkatapulttechnik Zielzellen im Corti-Organ, in den vestibulären Ganglien, den Sprialganglien und in der Stria vascularis markiert und isoliert. Hieraus wurden mittels semiquantitativer PCR die Expressionslevel des gfp bestimmt.
Ergebnisse: Das für die Regionen getrennte Expressionmuster zeigte eine starke Expression in den vestibulären Ganglien und der Stria vascularis. In den Spiralganglien und dem Corti-Organ war die Expression weniger stark, jedoch noch deutlich ausgeprägt. Schlussfolgerungen: Die Laser-Dissektionsmikroskopie erlaubt eine klare Auftrennung auch weniger Zellen aus paraffineingebetteten histologischen Präparaten des Innenohres unter Schonung der enthaltenen genetischen Information.