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Untersuchung des osteogenen Differenzierungsverhaltens von primären humanen Knochenzellen in Ca+2 reduziertem Medium
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Published: | October 19, 2004 |
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Fragestellung
Humane primäre Knochenzellen (hpK) sind eine potentielle Quelle für den autologen Knochenersatz. Zur Effizienz der Kultivierung von hpK mit ca+2 reduziertem Medium (CRM) gibt es nicht genügend Literaturangaben. Wir untersuchen den Einfluß von ca+2 über die zelluläre Expression der gewonnenen hpK.
Methoden
hpK gewonnen aus Hüftköpfen wurden bis zur ersten Passage in DMEM plus 20% FCS und mit oder ohne ca+2 kultiviert. Im Anschluß wurde die Expression osteogener [(Osteocalcin (OC), Collagen I, V (Col I, V), alkalische Phosphatase (ALP)] und fibroblastenspezifischer (CD 90) Marker immunzytologisch untersucht.
Ergebnisse
Im CRM wurde eine vermehrte Expression von ALP, OC und Col I, Col V beobachtet, was auf eine osteoblastäre Differenzierung hindeutet. Bei durchgeführten immunzytologischen Doppelmarkierungen haben wir beobachtet, daß Zellen, die Osteoblastenmarker expremieren, auch mit CD 90 reagierten.
Wir konnten bei den im CRM gezüchteten Zellen einen deutlichen Anstieg der Osteoblastenmarker beobachten. Aus diesem Grund scheint das CRM besser als DMEM zur Anzucht von hpK geeignet.
Schlussfolgerungen
Da der CD90 zur spezifischen Unterscheidung von hpK und Fibroblasten ungeeignet erscheint, bleibt die Frage offen, ob der Anstieg der Osteoblastenmarker im CRM durch ein vermindertes Wachstum der Fibroblasten oder durch eine Verstärkung der Expression der Osteoblastenmarker zustande kommt.
Zur Abklärung der oben dargestellten Problematik werden weitere Untersuchungen durchgeführt.