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Die Rolle VEGF-exprimierender mononukleärer Phagozyten im murinen Modell der Laser-induzierten choroidalen Neovaskularisation
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Veröffentlicht: | 30. Mai 2012 |
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Hintergrund: Ziel dieser Studie war, im murinen CNV-Modell zu beurteilen, ob infiltrierende oder residente Phagozyten eine Quelle für VEGF sind, und somit zu einer Neovaskularisation beitragen können.
Methoden: Zur Visualisierung mononukleärer Phagozyten wurden CX3CR1-Reportermäuse genutzt. Diese Mäuse exprimieren GFP unter dem CX3CR1-Promotor, der in mononukleären Phagozyten (dendritische Zellen, Makrophagen, Mikroglia) aktiv ist. In CX3CR1-Reportermäusen mit oder ohne CCR2-Expression wurden am Augenhintergrund mittels Spaltlampenapplikator zehn Laserspots (50 µm, 200 mW und 0,1 s Dauer) gesetzt. Hierbei wurden das retinale Pigmentepithel (RPE) und die Bruch´sche Membran rupturiert. Nach 3 und 6 Tagen wurden die Augen entnommen, Retina und Aderhaut beider Augen gepoolt, Einzelzellsuspensionen hergestellt und mit Fluoreszenz-markierten Antikörpern gegen verschiedene Zelltypen (CD11b, CX3CR1, CD45, CD31) gefärbt, die durchflusszytometrisch auf VEGF-Produktion analysiert wurden. CNV-Areale wurden in choroidalen flatmounts vermessen, während mononukleäre Phagozyten in retinalen flatmounts lokalisiert wurden.
Ergebnisse: Die Zahl VEGF-produzierender mononukleärer Phagozyten (CD11b+) stieg 3 Tage nach Laser signifikant an, insbesondere retinale Mikroglia (CX3CR1high CD45low) und choroidale Makrophagen (CX3CR1low CD45high). Die Mikroskopie ließ erkennen, dass diese Zellen kolokalisiert zu Laserspots akkumulierten. Die Anzahl der VEGF-exprimierenden choroidalen Makrophagen nahm an Tag 3 mehr als 28-fach zu und fiel bis Tag 6 wieder ab. Dieser drastische Anstieg blieb in CCR2-defizienten Mäusen aus. Die Erhöhung der VEGF-produzierenden retinalen Mikroglia war hingegen CCR2-unabhängig. Die CNV war in flatmounts CCR2-defizienter Mäusen vermindert.
Schlussfolgerungen: Die VEGF-Produktion okularer Phagozyten ist mittels Durchflusszytometrie quantifizierbar. CCR2-abhängige Makrophagen sind eine relevante Quelle für VEGF und akkumulieren nach Laserbehandlung. Eine CCR2-Hemmung reduziert die CNV und könnte einen therapeutischen Ansatzpunkt für eine anti-neovaskuläre Therapie darstellen.